质粒dna的提取

质粒dna的提取

质粒DNA提取的基本原理‌质粒DNA提取的基本原理是去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，具有自身复制起点，独立于细胞的主染色体之外，携带部分基因信息，通过基因表达使宿主细胞表现出相应的性状。在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。提取方法‌‌碱裂解法‌：使用碱与SDS裂解细菌，将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，质粒DNA释放到上清中。通过离心除去变性剂，回收复性的质粒DNA。‌煮沸法‌：将细菌悬浮于含有Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，加热到100℃使其裂解，然后离心收集上清中的质粒DNA。‌其他方法‌：包括微量提取、中量提取、大量提取，以及使用试剂盒方法提取等。具体方法包括碱裂解法、煮沸法、牙签法等，每种方法有其优缺点，适用于不同的实验目的。纯化方法大量提取的质粒DNA通常需要进一步纯化，常用方法包括：‌柱层析法‌：利用质粒DNA相对较小及共价闭合环状的性质，通过柱层析分离质粒和染色体DNA。‌氯化铯梯度离心法‌：利用溴化乙锭与线状DNA和闭环DNA结合量的差异进行分离。‌聚乙二醇分级沉淀法‌：一种最新的纯化方法，利用聚乙二醇的沉淀作用分离质粒DNA。