race技术

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RACE技术的定义和基本原理‌RACE（cDNA末端快速扩增技术）是一种基于PCR技术，用于从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法。它通过PCR技术实现，利用已知的一段cDNA片段，通过锚式PCR快速扩增cDNA的末端，从而获得完整的cDNA序列。RACE技术的操作过程和原理以SMART TM 3'-RACE为例，其操作过程包括：利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。使用一个基因特异引物GSP1作为上游引物，和一个含有部分接头序列的通用引物‌UPM作为下游引物，以cDNA第一链为模板进行PCR循环，扩增目的基因3'末端的DNA片段。RACE技术的优缺点优点：简单、快速、廉价。无需建立cDNA文库，节省时间和经费。只要引物设计正确，可以获得大量的感兴趣基因的全长。缺点：对实验条件要求较高，需要精确控制温度和时间。引物设计需要基于已知的基因序列信息。RACE技术的改进措施对传统RACE技术的改进主要包括引物设计和RT-PCR技术的改进：利用锁定引物合成第一链cDNA，消除oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位结合的影响。在5'端加尾时采用poly(C)，而不是poly(A)，以提高扩增效率。