过DEAE纤维素阴离子交换层析柱操作步骤

过DEAE纤维素阴离子交换层析柱操作步骤

最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于过DEAE纤维素阴离子交换层析柱操作步骤的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。

首先，控制柱下端螺旋夹，使柱上缓冲液面刚好下降到纤维素床表面，柱下端用10m刻度离心管收集液体，以便了解加样后液体流出量。

然后，将除盐后收集的清蛋白溶液缓慢加到纤维素柱上，调节层析柱下端的螺旋夹，使样品进入纤维素柱床，至液面降到纤维素柱床表面为止。

然后，将除盐的粗制清蛋白溶液上柱后，改用0.06mol/L、PH6.5的NH4AC缓冲液洗脱，小心用1ml0.06mol/LPH6.5NH4AC缓冲液洗涤粘在柱壁上的蛋白质样品。

然后，将待样品进入纤维素柱床内，继续用0.06mol/L、PH6.5NH4AC缓冲液流洗，同时注意流出液量。

然后，用g0.92mol/L的磺基水杨酸检查流出液是否含有蛋白质，由于纯化的清蛋白仍然结合有少量胆色素等物质，故肉眼可见一层浅黄色的成分。

最后，先用约6ml的1.5mol/L的NaCl-0.3mol/L的NH4AC溶液流洗，再用0.02mol/LPH6.5的NH4AC的溶液约10ml流洗平衡即可。